精子活动率 做定量精子制动化试验

　　为了观察人体血液中抗精子抗体的动态变化，了解疾病的转化和治疗效果，实施抗体定量测定是非常必要的，但抗体定性测定方法一直无法解决这个问题。虽然精子凝集试验可以大致了解抗精子抗体的强度，但精子凝集试验很难识别非特异性精子凝集和抗精子抗体引起的特异性精子凝集。通常用于凝集试验的血清应首先稀释 4～ 16 两倍，判断精子凝结的精子从 2 精子小凝块到数百个精子以上的大凝块，强度差距很大，因此很难定量测量抗精子抗体的效率。

　　半定量精子制动试验是通过被检原血清测定的。当抗体效率不是很强时，被检测血清的精子活动率（T）在 60% ～ 20% 与血清的精子活动率相比，（C）可以进行比较（C/T），若血清抗体效果强，T 精子活动率在 3% ～ 1% 之间，C/T 比较失去了意义。如果T 活动率变为 0，C/T 比较值（SIV）变成无限大（∞ ），此时，无法测量抗体量。定量精子制动化试验的特点是将被测血清双稀释，并根据半定量法确定各稀释度的精子活动率（T），然后测量标准阴性对照血清的精子活动率（C），然后按公式 C - T/C × 100计算精子制动的化率（Y）。

　　当抗体效率高时，精子活动率高（T）接近于 0，而 Y 值接近 100，血清双重稀释，T 值逐渐接近 C 值，这时 Y 将接近于 0.如果将血清稀释倍数作为横轴，则稀释每个度 Y 作为纵轴，根据 Y 通过改变，可以绘制精子制动率递减图，将递减曲线与递减曲线结合起来 50% Y 直线相交点，称为 50% 精子制动化指数，这个指数的血清稀释倍数，是我们要寻找的 50%精子制动化抗体的价格（SI），SI值不仅能准确表示抗体量，而且具有良好的再现性。

　　反应时间是关键因素，因为检测指标是精子活动率。香山浩二等人研究指出，1～ 测定在3h内 随着反应时间的延长，SI值的误差变小，SI值的误差变大。所以，要做不同的检体 SI比较必须在一定时间内进行，如果每次都有标准的阳性血清 对比SI，这对被检查的血清进行了修正 SI的误差非常重要。临床测定 2～ 3h内判断 SI值是最好的。

　　【准备】

　　(1)血清检查:从门诊患者静脉抽血，分离血清 56℃ 30min灭活处理， - 20℃ 冻存备用。

　　(2)精子悬浮液制备:手淫取健康男性精液，室温液化，离心沉淀(1350×g，5min)，去除精浆，使用约 沉淀精子量的20倍 10% 未婚妇女血清生理盐水灭活（UW S-生理盐水)洗涤沉淀精子 两次，然后少量使用 10% UW S-在沉淀精子块上加入生理盐水，轻轻摇动底部的精子沉淀块，放置在室温下 5～ 10min，收集上浮游精子，使用 10% UW S-生理盐水调节精子浓度 40×106/mL，供实验用。

　　(3)补体血清:市售或自制豚鼠血清。

　　【方法】

　　(1)未婚妇女血清或未婚妇女血清用于血清灭活 10% 灭活兔的血清被稀释了一倍。根据精子不动化试验方法，确定每种稀释的精子运动率（T% ）。

　　(2)以标准未婚女性血清为对比，确定其精子运动率（C% ）。

　　（3）根据 C - T×每个血清稀释度精子制动率100公式计算（Y）。

　　【判断】

　　以 Y 作为纵轴，血清稀释倍数作为横轴，绘制 S形弯曲的衰减曲线，这条曲线和 50% 精子运动率直线相交点的血清稀释倍数为 50% 抗体效率的精子制动（ST）。也就是血清检测中所含的抗体量。

　　根据同一个体不同时期的检测结果，可以观察其抗体量的动态变化。或者多个样品的检测结果也可以比较个体之间的抗体量，这是判断病态和临床治疗效果的一种非常重要的检测手段。定量精子制动化试验的特点是定量准确、重复性好，即使有轻微变化。缺点是操作程序多，不能一次处理多个样品，一般需要先定性测量，然后定量检查阳性样品。为了使测试结果正确，最好在每次测试中使用标准的阳性血清进行比较，以纠正样品的结果。